簡要描述：產品名稱：康為世紀 無內毒素質粒DNA中提試劑盒
產品貨號：CW2105S
英文名稱：EndoFree Plasmid Midi Kit
產品規格：50 preps

產品簡介：

　內毒素是質粒提取中常見的污染物，由于真核細胞對內毒素非常敏感，因此，如果質粒中含有內毒素會大大降低真核細胞轉染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內毒素質粒的新方法，提取的質粒最大限度去除內毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細胞的基礎上通過新型硅基質膜高效專一的結合質粒DNA，每個吸附柱最高可吸附100 μg的質粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統和除內毒素過濾柱，有效去除內毒素、蛋白等雜質。由本試劑盒所得質粒純度高、質量穩定，特別適用于細胞轉染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等下游實驗。

產品名稱：康為世紀 無內毒素質粒DNA中提試劑盒

產品貨號：CW2105S

產品組分：

額外試劑需求：無水乙醇、異丙醇。

使用注意：

1．所有組分可在干燥、室溫（15-30℃）環境穩定保存1年，更長時間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩定保存6個月。

2．第一次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復至室溫后使用。

3．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

4．使用前請先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現結晶或沉淀，如有結晶或沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應立即蓋緊蓋子。

6．提取質粒的量和純度與細菌培養濃度、菌株種類、質粒大小、質粒拷貝數等因素有關。

相關知識：

細菌的收獲可通過離心來進行， 而細菌的裂解則可以采用多種方法中的任意一種， 這些方法包括用非離子型或離子型去污劑、 有機溶劑或堿進行處理及用加熱處理等。 選擇哪一種方法取決于３個因素：質粒的大小、小腸桿菌菌株及裂解后用于純化質粒 DNA 的技術。

1)大質粒 (大于 15kb) 容易受損， 故應采用漫和裂解法從細胞中釋放出來。 將細菌懸于蔗糖等滲溶液中，然后用溶菌酶和 EDTA 進生處理，破壞細胞壁和細胞外膜，再加入 SDS 一類去污劑溶解球形體。 這種方法最大限度地減小了從具有正壓的細菌部把質粒釋放出來所需要的作用力。

2)可用更劇烈的方法來分離小質粒。在加入 EDTA 后，有時還在加入溶菌酶后讓細菌

暴露于去污劑， 通過煮沸或堿處理使之裂解。 這些處理可破壞堿基配對， 故可使宿主的線狀染色體 DNA 變性，但閉環質粒 DNA 鏈由于處于拓撲纏繞狀態而不能彼此分開。當條件恢復正常時，質粒 DNA 鏈迅速得到準確配置，重新形成*天然的超螺旋分子。

3)一些大腸桿菌菌株 (如 HB101 的一些變種衍生株 ) 用去污劑或加熱裂解時可釋放相對大量的糖類， 當隨后用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心進行質粒純化時它們會惹出麻煩。 糖類會在梯度中緊靠超螺旋質粒 DNA 所占位置形成一致密的、模糊的區帶。因此很難避免質粒 DNA 內污染有糖類，而糖類可抑制多種限制酶的活性。 故從諸 如 HB101 和 TG1 等大腸桿菌蓖株中大量制備質粒時，不宜使用煮沸法。

4)當從表達內切核酸酶 A 的大腸桿菌菌株 (endA+ 株，如 HB101) 中小量制備質粒時，建議不使用煮沸法。 因為煮沸不能*滅活內切核酸酶 A，以后在溫育 (如用限制酶消化 )時，質粒 DNA 會被降解。但如果通過一個附加步驟 (用酚：氯仿進行抽提 )可以避免此問題。

儲存與運輸

室溫 (15-30℃)

產品名稱：康為世紀 無內毒素質粒DNA中提試劑盒

產品貨號：CW2105S

產品訂購信息  

品牌               貨號                         名稱               規格

康為世紀    CW2105S     無內毒素質粒中提試劑盒  50 preps

關于公司：

康為世紀生物科技股份有限公司是一家立足于生命科學領域，有自主知識產權的國家優良企業，主要從事高附加值、高技術含量的生物試劑的研發與生產，為生命科學研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創新型生物產品和服務。產品線主要包括分子診斷原料酶、核酸采集與保護劑、核酸提取、分子診斷檢測試劑等，打破了中國生物研究與產業對進口試劑的依賴。

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