PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒技術原理

介紹

胚胎植入前遺傳學篩查（PGS）可利用微陣列方法或NGS來開展，目前IVF機構zui常用的是微陣列比較基因組雜交（array CGH）。

植入前基因篩查和診斷（PGS，PGD）是指體外受精（IVF）過程中所做的胚胎或卵母細胞測試，以便選擇沒有染色體變異和家族遺傳病等位基因的胚胎，提高懷孕成功率，減少特定遺傳病的傳遞風險。微陣列分析是IVF機構zui常用的PGS技術，這類試劑盒有好幾種都嵌合了PicoPLEX技術，被廣泛使用。包括Illumina’s 24Sure 微陣列, Perkin Elmer’s KaryoLite BoBs developed for PGS和 Oxford Gene Technology’s CytoSure™ 微陣列。不過實驗室研究的趨向是使用低覆蓋度（low pass）的新一代測序（NGS）替代微陣列，PicoPLEX DNA-seq正好滿足這種需求。

應用PicoPLEX的PGS技術：吸取單個胚胎細胞——細胞裂解，DNA擴增（Rubicon PicoPLEX WGA Kit單細胞全基因組擴增試劑盒）——微陣列基因組雜交——染色體拷貝數(shù)變異分析

詳細：

首先從受精卵吸取一個極體或者從受精后第三天的5到10個胚胎細胞吸取單細胞。裂解細胞后，釋放出來的DNA進行擴增，所得產(chǎn)物標記后與含有目標基因組的微陣列雜交。分析軟件會識別出拷貝數(shù)變異。PicoPLEX全基因組擴增技術具有高穩(wěn)定性和可再現(xiàn)性，已經(jīng)成為PGS的標準擴增技術。這一技術也適用任何單細胞樣品和皮克級純化DNA的基因特征分析。

PicoPLEX單細胞全基因組擴增技術

包括文庫構建和文庫擴增兩個步驟。文庫構建（預擴增）階段，設計的特殊引物能消除引物之間的雜交，從而提高引物和模板的配對效率。利用特殊隨機引物（Quasi-random primer）引發(fā)線性擴增進行全基因組擴增。特別設計的隨機引物（參見US patent 8,206,913）能減少引物二聚體的形成，從而提高引物和模板的配對效率。

PicoPLEX相比于以往的PCR、MDA、MALBC為基礎的單細胞全基因組擴增技術，操作簡單快速。

PicoPLEX單細胞全基因組擴增技術

分兩次擴增。*次擴增，特殊隨機引物與基因組DNA結合，形成莖環(huán)形結構文庫，第二次擴增，只有莖環(huán)形結構的文庫被擴增。

RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒技術原理及應用由華雅再生醫(yī)學旗艦公司：紅榮微再整理。

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RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒

PicoPLEX WGA Kit采用技術，設計優(yōu)化用于從單細胞中擴增全基因組DNA。起始樣本量低至單細胞或6pg基因組DNA。便捷的單管操作流程降低污染節(jié)省時間。結果穩(wěn)定性、重復性好。

PicoPLEX WGA Kit適用array CGH分析和PCR平臺。PicoPLEX技術被IVF供應商如BlueGnome信賴并用于PGS，BlueGnome CGH也是中國福利會和平婦幼保健院所用的PGS平臺。

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