如何讓細胞適應間充質干細胞無血清培養基

 　　間充質干細胞無血清培養基專門用來在無血清條件下培養特殊類型的細胞或進行特殊應用。

　　經歷了天然培養基、合成培養基后，間充質干細胞無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。

　　間充質干細胞無血清培養基是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的*培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子;又如需要測定某種細胞在培養過程中分泌某種物質的能力;或者要大規模的培養某種細胞，以獲得它們的分泌產物。因此研制出無血清培養基一直是生物科學工作者努力的目標。

　　目前，血清仍是動物細胞培養中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養。

　　在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養于含血清的培養基中，以保證細胞的特性不發生變化。

　　如何讓細胞適應間充質干細胞無血清培養基?具體有兩種方法：

　　1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基中。

　　一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞*適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

　　2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。

　　●以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基：25%SFM 混合培養基中，傳代培養。

　　●當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天)，在100%SFM培養基中傳代培養。

　　●每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

　　建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。

　　我們可以通過直接適應或連續適應，讓細胞適應間充質干細胞無血清培養基。