支原體檢測(cè)試劑盒的作用及實(shí)驗(yàn)過(guò)程

 　　支原體檢測(cè)試劑盒是用于在培養(yǎng)細(xì)胞中原位染色檢測(cè)支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在支原體污染。

　　培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，必須通過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測(cè)、RT-PCR檢測(cè)以及DNA熒光染色檢測(cè)。上述檢測(cè)方法中，除DNA熒光染色檢測(cè)外操作步驟相對(duì)比較煩瑣并且所需時(shí)間較長(zhǎng)。本支原體檢測(cè)試劑盒是通過(guò)Hoechst染色來(lái)檢測(cè)支原體的。支原體檢測(cè)試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測(cè)支原體污染。

　　細(xì)胞培養(yǎng)體系被支原體污染之后，支原體*的代謝酶類會(huì)產(chǎn)生支原體*的代謝產(chǎn)物，而真核細(xì)胞或細(xì)菌不會(huì)產(chǎn)生這種代謝產(chǎn)物，因而可以通過(guò)檢測(cè)這種代謝產(chǎn)物而檢測(cè)支原體的存在。如果樣品中含有支原體特異的代謝產(chǎn)物，反應(yīng)系統(tǒng)(包括樣品、反應(yīng)孔與反應(yīng)緩沖液)會(huì)產(chǎn)生藍(lán)綠色，代謝產(chǎn)物濃度越高，顏色越深。

　　支原體檢測(cè)試劑盒儲(chǔ)存條件

　　該試劑盒已滅菌封裝。4-25℃儲(chǔ)存，可達(dá)12個(gè)月。

　　支原體檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法

　　1. 所有操作均在室溫(22-28℃)下進(jìn)行。

　　2. 打開(kāi)檢測(cè)板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。

　　3. *個(gè)孔加入10 μL陰性對(duì)照，其他孔加入10 μL待測(cè)樣品或陽(yáng)性對(duì)照。

　　4. 輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。

　　5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。

　　6. 輕輕混勻，室溫孵育4分鐘。

　　7. 每孔加入5μL Stop Solution，輕輕混勻。

　　8. 可在30分鐘內(nèi)觀察樣品顏色的變化或進(jìn)行拍照保存：

　　a) 如果待測(cè)樣品的顏色深于陰性對(duì)照，表明樣品被支原體污染。

　　b) 如果待測(cè)樣品的顏色與陰性對(duì)照相同，表明樣品沒(méi)有支原體污染。

　　如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無(wú)污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。支原體檢測(cè)試劑盒如用于六孔板樣品檢測(cè)，至少可以檢測(cè)100個(gè)樣品。